樣品溶劑的選擇是實(shí)驗(yàn)中不可忽視且很重要的部分，一方面靠經(jīng)驗(yàn)，一方面還要考慮到所產(chǎn)生的溶劑效應(yīng)。溶劑效應(yīng)是什么？舉個(gè)最簡(jiǎn)單的例子，很多時(shí)候，此效應(yīng)可以導(dǎo)致峰形變差。而樣品溶液的組成與進(jìn)樣體積都對(duì)會(huì)導(dǎo)致溶劑效應(yīng)。如何避免產(chǎn)生的樣品溶劑效應(yīng)？在HPLC分析中樣品溶劑的選擇和流動(dòng)相是怎樣的聯(lián)系？GCMS、紫外檢測(cè)都分別有哪些溶劑選擇經(jīng)驗(yàn)？本文告訴你!

樣品溶劑的選擇要求，先粗略的概括一下：1、能夠溶解待測(cè)物質(zhì)；2、不影響待測(cè)物質(zhì)檢測(cè)；3、能夠在一定時(shí)間范圍內(nèi)保持待測(cè)物質(zhì)穩(wěn)定。

什么是溶劑效應(yīng)？

上圖中，色譜圖上較早洗脫的峰扭曲變形或者開(kāi)叉，與此同時(shí)較晚洗脫的峰則較為尖銳與對(duì)稱(chēng)，這些現(xiàn)象顯示一個(gè)比較特殊的起因――樣品溶液的溶劑很可能強(qiáng)于流動(dòng)相。此種強(qiáng)溶劑效應(yīng)的例子在左圖中可見(jiàn)。此處的樣 品溶液的溶劑是100％乙腈（100％的強(qiáng)溶劑），而流動(dòng)相的組成則較弱，18％的乙腈與72％的水。第一個(gè)峰是開(kāi)叉的，并且與第二個(gè)峰相比，明顯地變寬 了。當(dāng)樣品溶液的溶劑變成流動(dòng)相時(shí)，所有的峰形都改善了，且變得尖銳。見(jiàn)右圖。

為什么呢？這是因?yàn)楫?dāng)樣品進(jìn)樣時(shí),有可能出現(xiàn)峰展寬,最佳的樣品溶液組成和體積將會(huì)保持在10%甚至更低,在這個(gè)例子里,當(dāng)樣品溶劑與流動(dòng)相溶劑強(qiáng)度不同時(shí),換句話來(lái)說(shuō),也就是樣品未用流動(dòng)相溶解,因此,有些樣品分子溶解在強(qiáng)溶劑中,并隨強(qiáng)溶劑流過(guò)柱子,而有些則溶解在流動(dòng)相中,從而導(dǎo)致峰分叉。

當(dāng)樣品與流動(dòng)相強(qiáng)度相差較小,進(jìn)樣影響也會(huì)小,第一 個(gè)峰可能會(huì)寬于第二個(gè)峰,而當(dāng)這種展寬導(dǎo)致必要的分離度降低時(shí),這樣情況應(yīng)引起注意,在左圖中,使用一根短柱,和5μL進(jìn)樣,這與最佳進(jìn)樣體積4μL相 近,用了極性更強(qiáng)的溶劑導(dǎo)致分離度明顯的降低,從2.1降到1.5(如右圖,分離度為2或更大是評(píng)估一個(gè)完善方法的一個(gè)必要參數(shù),也是每天方法的驗(yàn)證參 數(shù),1.5只是一個(gè)基本的分離度,任何一個(gè)方法或一根柱子都必需滿足這個(gè)條件,當(dāng)進(jìn)樣為一倍時(shí),也就是10μL時(shí),分離度更一步降低,此方法就不行了。

HPLC溶劑的要求

溶劑的極性要與待測(cè)樣品相匹配，如果溶解度欠佳，樣品會(huì)在柱頭沉淀，不但影響純化分離，且會(huì)使柱子惡化。

HPLC溶劑關(guān)鍵性能 

反相液相色譜 

HPLC里面的溶劑效應(yīng)是如何產(chǎn)生的，該如何避免？如何判斷分叉的峰是否由溶劑效應(yīng)造成，第一就是通過(guò)HPLC儀器比對(duì)一下兩個(gè)劈叉峰的紫外吸收波譜，看看他們是否能完全一樣的μV特征吸收，第二將進(jìn)樣體積調(diào)節(jié)到0.1μl看看，峰是否好轉(zhuǎn)，如果滿足上面兩個(gè)條件幾乎就可以肯定是100%的溶劑效應(yīng)。產(chǎn)生原因:1，樣品溶液的溶劑很可能強(qiáng)于流動(dòng)相。例如樣品溶液的溶劑是100％乙腈（100％的強(qiáng)溶劑），而流動(dòng)相的組成則較弱，18％的乙腈與72％的水；產(chǎn)生原因2，就是進(jìn)樣量比較大；產(chǎn)生原因3，樣品的pH值與HPLC流動(dòng)相pH懸殊，比如酸性流動(dòng)相體系，樣品pH偏堿性（pH=10）,這種情況下也很有可能發(fā)生 其實(shí)上面三個(gè)原因歸結(jié)起來(lái)就是一個(gè)原因，那就是樣品的溶劑與流動(dòng)相存在一些不一樣，當(dāng)樣品進(jìn)入流動(dòng)相的時(shí)候，由于這種巨大的差異，一部分樣品溶解進(jìn)入了流動(dòng)相，一部分還留在進(jìn)樣的溶劑里面，所以在HPLC上出現(xiàn)了保留的差異，所以要解決這個(gè)問(wèn)題的最佳方案就是，使用流動(dòng)相的起始梯度溶解樣品，如果由于溶解度的問(wèn)題，不得不改用其余的溶劑，那就只能降低進(jìn)樣體積來(lái)解決，比如 5μl，1μL。

GC-MS 測(cè)定PAHs，HP-5MS (Agilent) 柱，固相萃取后使用甲醇洗脫。用甲醇做溶劑，是否會(huì)影響柱效和柱壽命。是否是最佳選擇？甲醇的沸點(diǎn)比較高，極性比較大，如果換成正己烷類(lèi)的弱極性，低沸點(diǎn)，配合一定的色譜條件可以實(shí)現(xiàn)溶劑聚焦作用，顯著提高保留時(shí)間較短的化合物的靈敏度和檢出線。甲醇相對(duì)于正己烷等極性小的溶劑，造成的柱流失大，國(guó)外用乙腈做GC-MS溶劑的文獻(xiàn)很多，很多用來(lái)減少前面溶劑轉(zhuǎn)換步驟，結(jié)合大體積進(jìn)樣等，溶劑先揮發(fā)分流走掉，從而進(jìn)入柱子乙腈溶劑的較少，可認(rèn)為對(duì)柱子影響不大，同時(shí)甲醇乙腈對(duì)比，乙腈的柱流失要少。

現(xiàn)有個(gè)樣品，其結(jié)構(gòu)中只有孤立的C=O。由于樣品溶于乙醇，所以第一次做紫外掃描時(shí)就以乙醇作為溶劑。結(jié)果在202nm處測(cè)得了最大吸收。檢測(cè)該化合物的HPLC條件是以乙腈－水作為流動(dòng)相的。我用流動(dòng)相作為溶劑再對(duì)該化合物進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果在197nm處測(cè)得了最大吸收。而在200～400nm范圍內(nèi)僅在285nm處測(cè)得一很小的吸收峰。在做紫外掃描時(shí)，樣品溶劑不同，測(cè)得的樣品的最大吸收波長(zhǎng)也會(huì)不同。如果用HPLC-UV檢測(cè)該化合物，波長(zhǎng)選為202nm（以乙醇作為溶劑測(cè)得的），是否合適呢？在做HPLC檢測(cè)時(shí)，樣品的溶劑如果不是流動(dòng)相之一，會(huì)不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果呢？C=O在270～300nm有較弱的紫外吸收（ε=10～100），285nm的峰應(yīng)為C=O的吸收。乙腈-水的極性強(qiáng)于乙醇，由于N-π躍遷的存在，將發(fā)生藍(lán)移（最大吸收202變?yōu)?97），在紫外區(qū)的邊緣測(cè)定有關(guān)物質(zhì)則干擾甚大，不合適；測(cè)定含量勉強(qiáng)可以，如果僅測(cè)定含量可以根據(jù)吸收情況適當(dāng)增加到210nm左右。如果溶劑跟流動(dòng)相一樣，那紫外吸收也應(yīng)該一致，否則樣品就非完全同一物質(zhì)。紫外測(cè)定選擇最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行含量測(cè)定，可以提高檢測(cè)靈敏度，減少

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