各類(lèi)高效液相色譜法：

    (一)液固吸附色譜法（LSC）流動(dòng)相為液體，固定相為固體吸附劑；1．分離機(jī)制：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力差異；分離前提：K不等或k不等；2．固定相：與LC比，固定相粒徑不同（<10μm）；3．流動(dòng)相：底劑（烷烴）+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑；例：正己烷或庚烷+氯仿；4．影響K的因素：與固定相性質(zhì)和流動(dòng)相性質(zhì)有關(guān)；溶質(zhì)分子極性↑，洗脫能力↓，k↑，tR↑；溶劑系統(tǒng)極性↑，洗脫能力↑，k↓，tR↓；注：調(diào)節(jié)溶劑極性，可以控制組分的保留時(shí)間；5．出柱順序：強(qiáng)極性組分后出柱，弱極性組分先出柱；6．硅膠吸水量↑，LSC→LLC硅膠含水量較小，吸附色譜，硅膠極性較大；硅膠含水量>17% ，分配色譜，硅膠失活→載體；吸附的水→固定液

    (二)液-液分配色譜法（LLC）1．分離機(jī)制：利用組分在兩相中溶解度的差異2．固定相：載體+固定液（物理或機(jī)械涂漬法）缺點(diǎn)：系統(tǒng)內(nèi)部壓力大，易流失，不實(shí)用。固定液-極性→NLLC，固定液-非極性→RLLC。3.①正相色譜-固定液極性>流動(dòng)相極性（NLLC）極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱：適于分離極性組分；②反相色譜-固定液極性<流動(dòng)相極性（RLLC）極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱：適于分離非極性組分；

    (三)化學(xué)鍵合相色譜法（BPC）1.化學(xué)鍵合相 （1）分離機(jī)制：分配+吸附（以L(fǎng)LC為基礎(chǔ)）；（2）特點(diǎn)：1）不易流失；2）熱穩(wěn)定性好；3）化學(xué)性能好；4）載樣量大； 5）適于梯度洗脫；2.反相鍵合相色譜（1）分離機(jī)制：疏溶劑理論；正相-流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力強(qiáng)，作用時(shí)間↑，K↑，組分tR↑；反相-流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力弱，作用時(shí)間↓，K↓，組分tR↓；（2）固定相：極性小的烷基鍵合相；C8柱，C18柱（ODS柱-HPLC約80%問(wèn)題）；（3）流動(dòng)相：極性大的甲醇-水或乙腈-水；流動(dòng)相極性>固定相極性；底劑+有機(jī)調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑）；例：水+甲醇，乙腈，THF；（4）流動(dòng)相極性與k的關(guān)系：流動(dòng)相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑（5）出柱順序：極性大的組分先出柱；極性小的組分后出柱；（6）適用：非極性~中等極性組分（HPLC 80%問(wèn)題）3.正相鍵合相色譜(1)分離機(jī)制：溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力(2)固定相：極性大的氰基或氨基鍵合相；(3)流動(dòng)相：極性小（同LSC）；底劑+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑；例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇；(4)流動(dòng)相極性與K的關(guān)系：流動(dòng)相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓；(5)出柱順序：結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱；(6)適用：氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍小），分離物質(zhì)也相似；氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性，分析極性大物質(zhì)、糖類(lèi)等；4.離子對(duì)色譜和離子抑制色譜，反相離子對(duì)色譜法（IPC或PIC）反相色譜中，在極性流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑，使被測(cè)組分與其中的反離子形成中性離子對(duì)，增加K和tR，以改善分離；(1)離子對(duì)試劑：烷基磺酸鈉→分析堿，四丁基季胺鹽→分析酸。(2)影響K的因素: a．與m的極性有關(guān)（同反相色譜）；b．與R的鏈長(zhǎng)有關(guān)：R↑長(zhǎng)，極性↓小，tR↑，k↑；(3)適用：較強(qiáng)的有機(jī)酸、堿；反相離子抑制色譜；在反相色譜中，通過(guò)加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值，抑制；組分解離，增加其K和tR，以達(dá)到改善分離目的；1）離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質(zhì)； pH一定的緩沖溶液；2）K的影響因素：與流動(dòng)相極性有關(guān)，還與pH值有關(guān)；選擇流動(dòng)相：應(yīng)同時(shí)考慮極性及pH值；酸性物質(zhì)-加入酸HAc，tR↑，K↑；堿性物質(zhì)-加入堿NH3·H2O，tR↑，K↑；  調(diào)節(jié)pH范圍：3.0~8.0；pH>8.0破壞鍵合相與載體的結(jié)合；pH<3.0腐蝕柱子；3）適用：極弱酸堿物質(zhì)；pH=3~7弱酸；pH=7~8弱堿；兩性化合物；

---本文摘自《實(shí)驗(yàn)與分析》